髂动脉注射骨转移建模

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上期回顾:小鼠原位胰腺癌荧光模型

当今世界,恶性肿瘤已成为人类健康的最大杀手之一,其危害性一直呈上升趋势。关于乳腺癌的骨定植,特别是在癌症的早期阶段,乳腺癌细胞与骨中微环境细胞的相互作用。本期实验的总体目标是通过直接向后肢组织输送癌细胞,包括骨骼动脉注射等建立实验性骨转移瘤。

(一)血管准备

操作步骤:

1.通过捏五到六周龄20克小鼠的足趾来确定适当的麻醉水平。对小鼠眼睛涂油膏后,用无菌、70%异丙醇浸泡过的棉签擦拭被去毛的右腹股沟区域,然后用聚维酮碘擦洗。再用无菌布盖住嘴巴,然后用无菌的安装了3号手柄的10号碳钢刀片,在第四和第五乳头之间的右下腹部切开一个1-1.2厘米的切口,并将小鼠放在在标准台式解剖显微镜下。

2.在4倍物镜下,用钝性分离钳插入到脂肪组织和腹膜切口处,将两侧的组织向外推,以显示出髂血管和神经。然后用直细针刺破血管和靠近血管的神经之间的结缔组织。然后将直角钳滑过结缔组织,在髂血管下方,将直角钳插入血管另一侧的结缔组织中,引导直角钳穿过组织。

3.一旦直角钳就位,可进一步将髂静脉和动脉与周围组织分开。解剖时要保持血管在直角钳上。当清晰看到血管时,用直镊子将4-0缝合线穿过直角钳,在血管下面慢慢地轻轻地缝合。把髂总静脉和动脉血管都提起来。

(二)注射和注射后护理

操作步骤:

1.当血管准备好后,用移液管将肿瘤细胞上下吹打几次,形成单细胞悬液,并吹打掉细胞团块。然后用31号胰岛素注射器吸微升每个小鼠的细胞悬液。

2.现在把直角钳移到血管下面,用缝线作引导,打开镊子,使血管轻轻的停留在上面。用另一只手,将针尖侧斜面插入动脉的管腔内,缓慢地注入细胞,细胞悬浮液会通过血管冲洗血液。

3.注入所有的细胞后,轻轻地拔下针头,用镊子夹起血管,防止出血。然后拉开缝合线,最后迅速取出镊子,并将棉签压在切口上5-10分钟以止血。

实验结果:代表性髂内后动脉肿瘤细胞定位

耳朵,是具有代表性的动物整体发光图像。经过五次髂动脉注射后,10-5绿色荧光蛋白(GFP)标记了MCF-7乳腺癌细胞,其次进行D-荧光素标记,并进行眶窦注射。

在注射后十四天,可以从髂内动脉注射后肢骨看到一个强烈的发光信号,而从对侧控制骨却看不到发光信号,这证明了注射细胞的特异性定位。

对肿瘤骨进行切片并用苏木精-伊红染色(HE)染色,显示出一个紧凑的鹅卵石状细胞群,并且有大的细胞核。这表明在移植动脉后14天,在骨组织中可见微小的MCF-7转移灶。

进一步对骨切片进行免疫荧光染色还发现了一种混合的MCF-7细胞,包含有成骨细胞和前成骨细胞。

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